Mis à jour le 18 avril 2024 à 12h48
La PCR
La norme U47-600-1 définit l’expression des résultats comme suit :
Non détecté : absence du pathogène recherché par rapport au seuil de détection de la méthode utilisée = Négatif
Détecté : présence du pathogène recherché = Positif
Limite de détection : présence du pathogène recherché en quantité proche du seuil de détection = Positif faible
Inhibé : un composant de l’échantillon a empêché l’interprétation du résultat = Ininterprétable
Elle précise également que « La restitution des résultats acquis à partir du mélange d’une même matrice (provenant d’animaux différents appartenant ou non à un même cheptel ou unité épidémiologique), ou acquis à partir de mélange de matrices différentes (provenant ou non d’un même sujet), est possible. »
Mais « le résultat obtenu à partir d’un mélange de prélèvements ne présage pas des résultats qui seraient obtenus à partir d’analyses individuelles. »
Le Ct
Qu’est-ce que le Ct ? La PCR consiste à amplifier sélectivement une séquence nucléotidique d’intérêt (ADN ou ARN, sans présager de la viabilité de l’agent pathogène auquel il appartient), en faire des copies en nombre exponentiel, de façon à rendre sa présence détectable. Dans la PCR temps réel, cette détection s’effectue par mesure de fluorescence à intervalles réguliers. Pour simplifier, la PCR se déroule sur une durée ou « échelle de temps » allant de 0 à 40 ou 45 cycles. Le Ct (Cycle threshold ou cycle seuil) est le cycle où la positivité se déclare. Donc plus le Ct est un nombre petit (= un signal positif arrivé tôt), plus le prélèvement était fortement chargé. Le Ct n’est pas une valeur absolue attachée à un prélèvement. Il est lié aux conditions analytiques : il ne doit pas être interprété en l’état et séparé de la série d’analyses. Néanmoins il peut être catégorisé.
Les Résultats en PCR
Les Résultats obtenus sont catégorisés en fonction de leur Ct.
Les différentes Catégories utilisées au LVD25 sont détaillées dans le tableau ci dessous :
Les seuils retenus ont été choisis soit par le gestionnaire de la maladie, soit par le laboratoire dans un souci de cohérence.
La signification des résultats est la suivante:
- Négatif = non détecté : absence du pathogène recherché par rapport au seuil de détection de la méthode utilisée dans l’échantillon soumis à l’analyse.
- Positif faible = en limite de détection : présence du pathogène recherché en quantité proche du seuil de détection. C’est la zone de non répétabilité.
- Positif = détecté : présence du pathogène recherché.
- Positif fort = détecté : présence du pathogène recherché en quantité importante
La BVD
L’interprétation de vos résultats d’analyse PCR a été établie avec le contexte épidémiologique du département du Doubs et les engagements sanitaires pris par le GDS.
L’interprétation « POS.FORT » fait référence à la probabilité que l’animal testé soit un « IPI » (Infecté permament immunotolérant). Les seuils ont été ajustés selon la nature du prélèvement (sang ou biopsie auriculaire) et selon les données épidémiologiques recueillies depuis de nombreuses années.
Les Salmonelles
La PCR permet de détecter le génome des salmonelles de façon plus sensible que la culture microbienne. Mais elle ne distingue pas les sous-espèces.
Les échantillons ayant un résultat positif sont repris en bactériologie afin d’établir le sérotype de salmonelle incriminé par typage de la souche bactérienne. La culture microbienne étant moins sensible que la PCR, certains échantillons ne permettent pas d’obtenir une souche revivifiable.
La technique ELISA
Norme NF U47-019
Les tests immunoenzymatiques (ELISA) s’appliquent particulièrement à la recherche d’anticorps ou d’antigènes dans le sérum ou d’autres fluides biologiques.
Comme pour tout test immunologique, le résultat du test ELISA ne vaut que pour le produit soumis à l’analyse.
Quand ce produit est une matrice différente du sérum individuel (exemple: mélange de sérums, plasma, lait, buvard, etc.), un résultat (négatif, positif, douteux) n’est pas extrapolable au(x) sérum(s) individuel(s) correspondant(s), sauf si cette extrapolation pour la trousse utilisée a préalablement été validée.
Les différents résultats obtenus selon la méthode ELISA sont détaillées dans le tableau ci dessous :
Autres techniques en Immunologie
Recherche des anticorps contre la Brucellose
Ce tableau résume les interprétations possibles :
